小鼠胚胎成纤维细胞

　　3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞系是脂肪细胞分化研究的经典模型，以可诱导分化为成熟脂肪细胞、增殖稳定及代谢特征明确为核心优势，在脂肪细胞生物学、肥胖机制及代谢疾病药物研发中应用广泛，为解析脂肪细胞分化调控网络提供了可靠实验工具。

　　来源与背景：该细胞系源自1962年建立的Swiss小鼠胚胎成纤维细胞系3T3的亚克隆，因具有稳定的脂肪分化潜能而被单独命名。3T3系列细胞系以“每3天传代一次，每次接种3×10⁵细胞"的培养规范得名，而L1亚克隆的du特jia值在于经诱导后90%以上细胞可分化为含脂滴的成熟脂肪细胞，wan美模拟体内脂肪细胞形成过程。在全球肥胖率持续攀升的背景下，其建立填bu了脂肪细胞体外研究模型的空白，至今仍是脂肪分化机制研究引用率z高的细胞系。

　　细胞特性：未分化时呈典型成纤维细胞形态，贴壁生长呈长梭形，排列有序，细胞质均匀，细胞核呈椭圆形，核质比约1:3，增殖状态稳定，倍增时间约24小时。核心特性体现为分化潜能卓yue，在特定诱导剂作用下，7天内可见脂滴形成，14天脂滴融合成大液泡，油红O染色阳性率达95%；代谢特征明确，分化后甘油三酯含量是未分化细胞的8倍，脂联素、瘦素分泌量随分化进程逐步升高，与体内脂肪细胞代谢模式一致；遗传稳定性高，连续传代50次后仍保持分化能力，染色体核型为小鼠正常二倍体，无明显畸变。传代时采用常规消化液处理2-3分钟，传代比例1:4，过度密集会抑制增殖，建议细胞密度达70%时及时传代。

培养与分化条件：基础培养采用含10%胎牛血清的DMEM培养基，添加1%双抗，培养环境为37℃、5%CO₂饱和湿度。细胞汇合度达100%后进入接触抑制期，此阶段是诱导分化的关键窗口。分化诱导需分阶段进行：第一阶段（0-2天）使用含1μM地塞mi松、0.5mMIBMX及10μg/ml胰岛素的诱导液；第二阶段（2-8天）换用含胰岛素的维持液；之后用基础培养基培养至成熟。分化过程中需严格控制血清质量，**胎牛血清可使分化率提升15%，而低糖培养基会抑制脂滴积累。冻存推荐含10%DMSO的胎牛血清冻存液，程序降温后液氮保存，复苏后24小时贴壁率达90%，分化能力不受影响。

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