小麦胚芽凝集素

小麦胚芽凝集素

　　小麦胚芽凝集素，AF488标记（下文简称“AF488 WGA"），是一种与N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸结合的凝集素，是绿色荧光中z亮的WGA缀合物。WGA与糖缀合物结合，其衍生物和缀合物被广泛用于标记细胞膜和纤维化瘢痕组织，用于荧光成像和分析。WGA的糖结合特异性与β-1,4-GlcNAc-连接残基的序列，即几丁质酶有关。每个单体包含两个相同的非相互作用的结合位点，它们与3或4β-1,4-GlcNAc单元互补。在所检测的单糖中，只有GlcNAc与WGA结合。甘露聚糖不结合，而GalNAc只能弱结合。WGA与含有Galβ（1--4）GlcNAcβ（1--3）重复序列（即聚乳糖胺型聚糖）的大寡糖中的内部GlcNAc残基具有高亲和力结合。N-乙酰神经氨酸只参与与WGA的低亲和力相互作用。WGA表现出了丰富的糖类特异性结合模式，可用于复杂碳水化合物的结构分析。

　　使用方法

　　溶液配制

　　AF488 WGA储备溶液(200X)配制

　　将500µL ddH2O添加到粉末小瓶中，制成2 mg/mL的储备溶液。

　　【注】：重新配制的储备溶液可在4℃下短期储存，或在-20℃下长期储存。

　　AF488 WGA工作溶液(1X)配制

　　（1）将5μL 200X WGA储备溶液添加到1 mL HHBS缓冲液中。

　　【注】：不同细胞系的优化染色浓度可能不同。活细胞的推荐起始浓度为5-10µg/mL。

　　操作步骤

　　活细胞染色

　　用HHBS缓冲液清洗细胞2次。

　　添加100µL AF488 WGA工作溶液。

　　将细胞与AF488 WGA工作溶液在37℃下孵育10-30 min。

　　用HHBS缓冲液清洗细胞2次。

　　使用FITC滤光片组在荧光显微镜上成像细胞。

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