偶联/标记抗体介绍:抗体偶联或标记技术是将特定分子(如荧光染料、酶、药物或小分子化合物)通过化学方法共价连接到抗体上的过程。这项技术是生物医学研究和药物开发中的核心工具,广泛应用于诊断、治疗和基础研究领域。
偶联/标记抗体的主要类型与应用
诊断用标记抗体:通过连接易于检测的标记物(如荧光物质FITC、Cy3/Cy5,或酶HRP、碱性磷酸酶),用于免疫检测技术(如ELISA、Western Blot、流式细胞术和侧向层析试纸条),以放大信号、提高检测灵敏度。
治疗用抗体偶联物(ADC):将强效细胞毒性药物(有效载荷)通过特定接头连接到抗体上,形成抗体-药物偶联物。ADC能选择性靶向肿瘤细胞,减少对正常细胞的损伤,是癌症靶向治疗的重要方向。截至2025年初,已有多种ADC获得主要监管机构批准。
研究与纯化用标记抗体:偶联生·物素、多肽标签(如His-tag)或蛋白A/G,用于蛋白质纯化、相互作用研究或细胞分选。
主要偶联技术方法
抗体偶联技术根据其特异性和可控性,主要分为以下几类:
随机偶联(如赖氨酸偶联):利用抗体表面约40个溶剂可及的赖氨酸残基上的氨基(-NH₂)进行反应。这是成熟、应用广泛的技术之一,工艺可靠且可重复,已成功用于多种商业化ADC(如Kadcyla®、Elahere®)。然而,该方法可能导致药物抗体比(DAR)异质,影响药物的稳定性和药代动力学。
半胱·氨酸偶联(链间二硫键还原):通过还原抗体链间的二硫键,产生游离的巯基(-SH),再与马来酰亚胺等试剂反应。这种方法比赖氨酸偶联产生的DAR分布更均一(常以DAR4为主),是目前临床ADC中*主流的偶联策略,约三分之二的已批准ADC采用此技术。但其缺点是连接物在血浆中可能发生反向迈克尔加成,导致药物过早释放。
位点特异性偶联:通过基因工程引入非天然氨基酸(ncAAs)或酶促修饰(如转谷氨·酰胺酶、糖基转移酶),在抗体的特定氨基酸位点进行精确偶联。这类方法能产生高度均一的ADC产品,理论上具有更好的药效和安全性,但工艺开发和质量控制(CMC)挑战更大,是当前研发的前沿方向。
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