蛋白酶K介绍

蛋白酶K

　　蛋白酶K（Proteinase K），相对分子量约为29.3 kDa,能够切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。较广的pH范围内（pH 4~12.5）均有活性。一般工作浓度是50~100µg/ml，但在变性剂如1%SDS中可提高活性，所以在使用中常根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH、温度等因素确定具体的工作浓度。常用浓度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶K的活力影响不大。

　　常用于基因组DNA的提取，脉冲电泳的染色体DNA的制备等实验。

　　保存方法

　　冰袋运输，-20℃保存，保质期24个月，避免反复冻融。

　　使用方法

　　1.配制蛋白酶K溶液：一般配制浓度为20 mg/ml蛋白酶K溶液。例如，可将200 mg的蛋白酶K加入到9.5 ml dd水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K*溶解。不要涡旋混合，再加水定容到10 ml，后分装成小份贮存于-20℃。

　　2.根据终浓度50~100µg/ml，吸取适量蛋白酶K溶液，到待消化样品中，孵育温度为55~65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15 min至48 h，依据样本情况而定。

　　注意事项

　　1.如果需把20 mg/ml的蛋白酶K再稀释成，建议使用pH7.4~7.8的10 mM Tris-HCl进行稀释。

　　2.本产品对人体有害，操作时请务必实验时穿实验服，戴一次性手套和口罩，避免直接接触人体或吸入体内。

　　3.本产品仅限于专业人员的科学研究用。

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