外泌体产品描述

外泌体产品描述

　　本产品是一款基于沉淀法的外泌体分离试剂盒，适用于多种样本的外泌体分离，具有操作简便、分离速度快和高回收率的优势。本试剂盒分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。本试剂盒兼容多种样本类型，适用于血清、血浆、细胞培养上清和尿液等。

　　运输与保存

　　常温运输。组分A在4℃保存，组分B在常温保存，有效期12个月。

　　使用方法

　　自备仪器、试剂与耗材：高速冷冻离心机；离心管

　　1.准备工作

　　(1)取出在4℃保存的外泌体浓缩剂，使其恢复至室温。

　　(2)建议使用新鲜样本；如样本保存在-80℃，请于37℃水浴中解冻备用。

　　2.样品预处理

　　(1)去除细胞：对含细胞样品，4℃，300g，离心5min，将上清转移至新离心管；无细胞样品可跳过此步骤。

　　(2)去除细胞及细胞碎片：4℃，2,000g，离心10min，将上清转移至新离心管。

　　(3)去除大体积颗粒：将步骤(2)获得的上清液在4℃，12,000g，离心15min，取上清转移至新离心管。或者：将步骤(2)的上清液通过0.45μm微孔滤膜过滤，收集滤液。

　　3.沉淀外泌体

　　(1)将预处理后的样品20 mL加入50mL离心管，加入5mL外泌体浓缩剂，涡旋混匀1min（务必混匀）。若需调整体积，可按样本:外泌体浓缩剂=4:1的比例等比放大或缩小。

　　(2)混匀后，4℃孵育8 h以上；如时间允许，推荐在4℃过夜孵育，但建议不超过24h。

　　(3)将样品4℃，12,000g离心45 min。弃上清，吸弃或小心倒出上清后，使用200μL移液器尽量轻轻吸净残余上清。

　　4.回收外泌体

　　(1)重悬外泌体：向沉淀中加入200μL无菌PBS，用移液器轻柔上下吹打，充分混匀。建议每20mL细胞培养上清用200μL无菌PBS重悬。

　　(2)收集外泌体颗粒：将重悬液转移至新的1.5mL离心管，在4℃、12,000g下离心5min，保留上清，此上清液中富含外泌体颗粒。注：若沉淀较多，取离心后上清液，12,000g，5min，离心多次，直至无明显沉淀，该上清液即为外泌体。

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