PEI转染试剂

PEI转染试剂

　　一、产品描述

　　1.EZ Trans细胞转染试剂作为新一代的转染试剂，其转染原理是带正电的阳离子聚合物与核酸中带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。

　　2.经过李记生物的优化处理，本产品具有转染效率高，细胞毒性低，操作简单，重复性好，适用范围广等特点。

　　3.EZ Trans细胞转染试剂与Thermo/Lipo 2000/Invotrigen/Lipofectamine 2000等产品相比，操作更便捷，详见使用方法。

　　三、保存方法

　　冰袋运输，4℃保存，保质期12个月。不可冷冻！

　　四、使用方法（以24孔板为例，其他培养皿中转染请参考表1）

　　1.接种细胞

　　对于贴壁细胞，转染前18-24 h进行铺板（不含抗生素），使其在转染时的密度大约在80%左右。对于悬浮细胞，转染当天，配制EZ Trans-DNA复合物之前进行铺板，每500µL生长培养基中加入4~8×105cells。

　　【注】：培养液中的血清不影响转染效率。转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化合适的使用量。

　　2.准备EZ Trans-DNA复合物

　　⑴对于每孔细胞，将1μg质粒DNA稀释到40μL无血清的高糖DMEM培养基（或者OPTI-MEMⅠ培养基），混匀。

　　⑵对于每孔细胞，将3μL EZ Trans转染试剂稀释到40μL无血清的高糖DMEM培养基（或者OPTI-MEMⅠ培养基），轻轻混匀。

　　【注】：无血清的高糖DMEM培养基是稀释液，不能使用含血清的培养基进行DNA和EZ Trans转染试剂的稀释。因为EZ Trans-DNA转染复合物的形成过程不能含有血清。

　　（3）将稀释好的EZ Trans转染试剂尽快全部加入到已稀释好的质粒DNA中，轻轻混匀。

　　【注】：此混合的顺序不能反向进行。

　　（4）室温放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA复合物。

　　3.转染细胞

　　（1）将上述80μL EZ Trans-DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微振荡，让EZ Trans-DNA复合物分散均匀。

　　（2）在37℃，5%CO2培养箱培养6-18 h，去除含EZ Trans-DNA复合物的培养液，更换新的培养液，继续培养至对转入基因表达分析。

　　【注】：筛选稳定转染细胞株，转染细胞24 h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），在37℃，5%CO2培养箱中孵育24 h，加入筛选培养基。在有转染抗性基因相匹配的药物筛选条件下，约1～2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

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